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几种常用溶液的配制方法电线杆

时间:2019-08-22 16:25:58 来源:越东机械网 浏览量:2

几种常用溶液的配制方法

1、PBS:

取PBS溶于1000ml的蒸馏水中,混匀,测pH值应在7.2~7.4之间,若偏离此范围,请用0.1N的HCL或NaOH调整。

2、TBS:

2.1Tris缓冲液配方:(0.5MpH7.6)

Tris(三羟甲基氨基甲烷)60.57g

1NHCL约420ml

双蒸水加至1000ml

Tris缓冲液配制方法:

先以少量双蒸水(300~500ml)溶解Tris,加入HCl后,用HCl(1N)或NaOH(1N)将pH调至7.6,最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液,4℃冰箱中保存。

2.2TBS配方:

Tris-HCI缓冲液(0.5MpH7.6)100ml

NaCI8.5~9g(0.15mol/L)

双蒸水加至1000ml

TBS配制方法:

先以少量双蒸水溶解NaCl,再加入Tris-HCl缓冲液,最后加双蒸水至1000ml,充分摇匀。

3、枸橼酸盐缓冲液(Citratebuffer):

3.1储存液:

A.0.1M枸橼酸溶液:称取21.01g枸橼酸(C6H8O7·H20)溶于1000ml蒸馏水中。

B.0.1M枸橼酸钠溶液:称取29.41g枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H20)溶于1000ml蒸馏水中。

3.2工作液:

取9mlA液和41mlB液加入450ml蒸馏水中,溶液pH值应为6.0±0.1

4、胰酶(Trypsin):

4.1胰蛋白酶消化液:

常用浓度为0.125%,即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合(1:3稀释),则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整,浓度范围可以从0.05%(1:10稀释)至0.25%(1:1稀释)。

4.2胰蛋白酶:

取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml0.05%或0.1%pH7.8的无水氯化钙水溶液中,溶解即可。

5、胃酶(Pepsin):

4%胃蛋白酶,用0.1mol/LHCL配制。

6、DAB:

6.1DABKit:

使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中,即可获得1mlDAB工作液,简单易用。

6.1DAB:

6mgDAB溶于10mlTBS(0.05MpH7.6),再加入0.1ml浓度为3%的H2O2,过滤掉沉淀物,即可。

7、AEC:

4mgAEC溶于1ml二甲基甲酰胺中,加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液(pH5.2),然后加入0.15ml3%H2O2,过滤掉沉淀物。

8、RIPA:

1×PBS,1%NP40,0.5sodiumdeoxycholate,0.1%SDS(此液体可长期保存)。以下抑制剂以储存液方式保存,临用前加入RIPA中。

8.110mg/mlPMSF异丙醇溶液(用量为10ml/ml)

8.2Aprotinin(Sigma产品,用量为30ml/ml)

8.31000mMsodiumorthovanadate冷冻液

(用量为10ml/ml)

9、BlottoA:

常规使用1×PBS,5%milk,0.05%Tween20。

10、BlottoB:

与Phosphotyrosine抗体共用,1×PBS,1%milk,0.05%Tween20。部分实验中milk可完全去除,但可能引起背景增高。

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